PCR方法

摘要

提供了平衡的增倍PCR方法的方法。在该方法中，当在第一和第二个扩增时期当引物的或选物限制地调节第一个引物套的第一个扩增子和第二个引物套的第二个扩增子生成的相对速度时，在单个试管中利用两个或多个成顺序的暂时PCR时期有效地分开两个或多个PCR反应。同时提供了在手术内诊断和预后中发现特殊用途的快速RT-PCR方法，例如通过确定在岗哨淋巴结中的瘤胚抗原(CEA)的表达水平，在诊断恶性食管腺癌中发现的。

主权项

1. 一种多重、定量PCR方法，包括在第一扩增时期和第二扩增时期对PCR反应混合物进行PCR扩增的步骤，所述反应混合物包括一种DNA样品、一种具有第一Tm的第一引物套和一种具有第二Tm的第二引物套，其中第二Tm不同于第一Tm，每个扩增时期包括一个或多个PCR循环，每个PCR循环包括变性步骤，退火步骤和延长步骤，所述延长步骤在与所述退火步骤相同的温度下进行，其中第一扩增时期的退火步骤在与第二扩增时期的退火步骤不同的温度下进行，以调节在第一和第二扩增时期第一引物套生产的第一扩增子和第二引物套生产的第二扩增子的相对速率。