发明名称 |
一种在酵母中重组表达生产人胸腺肽的方法 |
摘要 |
本发明提供一种可以大规模,低成本生产人胸腺肽的方法,所述方法通过酶切操作形成具有如下结构的融合基因序列:A-X-C,其中A部分为编码成熟人血清白蛋白N-端1-150~1-372位氨基酸的核苷酸序列,X为编码包含肠激酶或烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶切位点的连接肽的核苷酸序列,C为人胸腺肽基因。将融合基因序列连接到表达载体,将表达载体转化导入酵母菌中,经诱导表达获得可溶性的人血清白蛋白-胸腺肽融合蛋白,通过加入肠激酶或烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶切,经分离纯化获得重组人胸腺肽。本发明所述的胸腺肽生产方法具有可保证产品质量一致性,不受原料来源限制,且成本很低,表达量高,可以大规模生产等优点。 |
申请公布号 |
CN102925470B |
申请公布日期 |
2016.07.06 |
申请号 |
CN201210457005.8 |
申请日期 |
2012.11.13 |
申请人 |
绍兴华泰生物科技有限公司 |
发明人 |
徐建华 |
分类号 |
C12N15/62(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/62(2006.01)I |
代理机构 |
浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 |
代理人 |
徐飞虎;徐关寿 |
主权项 |
一种生产人胸腺肽的方法,所述方法包括如下步骤:(1)、在保持各自基因密码子阅读框架不变的前提下,在编码人血清白蛋白部分基因序列和人胸腺肽基因的两侧引入限制性内切酶识别位点,然后通过酶切操作形成具有如下结构的融合基因序列:A‑X‑C,其中A部分为编码成熟人血清白蛋白N‑端1‑150~1‑372位氨基酸的核苷酸序列,X为编码包含肠激酶或烟草蚀纹病毒蛋白酶切位点的连接肽的核苷酸序列,C为人胸腺肽基因;(2)、将上述的A‑X‑C融合基因序列连接到表达载体,将表达载体转化导入酵母菌中,经筛选得到重组基因工程菌;(3)、高密度发酵重组酵母菌,经诱导表达获得可溶性的人血清白蛋白‑胸腺肽融合蛋白,加入肠激酶或烟草蚀纹病毒蛋白酶切,经分离纯化获得重组人胸腺肽。 |
地址 |
312300 浙江省绍兴市上虞市曹娥街道人民西路567号 |