| 主权项 |
1.一种控制于哺乳动物宿主细胞内培养哺动物细 胞时所产生的醣蛋白内寡糖支链上唾液酸含量的 方法,其包括: 培养在制造期之哺乳类动物宿主细胞,其特征在于 : i)在细胞培养物中添加浓度约为0.1m M至20 mM之烷酸 或其盐类;且 ii)保持细胞培养物之渗透压在250至600mOsm之范围内 ;且 iii)保持细胞培养物之温度在约30℃至35℃之间。2. 如申请专利范围第1项之方法,其中醣蛋白内寡糖 支链上唾液酸含量增加,且 藉将细胞培养于烷酸或其盐类浓度约在1m M至6 m M 之间,并保持渗透压在300至450mOsm之范围内减低细 胞特定之制造力。3.如申请专利范围第2项之方法, 其中之宿主细胞乃是中国大颊鼠卵巢细胞(CHO cell) 。4.如申请专利范围第3项之方法,其中之烷酸或其 盐类为丁酸钠。5.如申请专利范围第4项之方法,其 中所生成之醣蛋白属于哺乳类动物醣蛋白。6.如 申请专利范围第5项之方法,其中所生成之醣蛋白 是肿瘤坏死因子受体1–免疫球蛋白G1嵌合体。7. 如申请专利范围第6项之方法,其中之宿主细胞乃 是将含有编码可溶性第一型肿瘤坏死因子受体– 免疫球蛋白TNFR1-IgG1嵌合体的cDNA之载体以转移感 染的方式感染之dp 12. 中国大颊鼠卵巢细胞株(dp12. CHO cell)。8.如申请专利范围第1项之方法,其中醣 蛋白内寡糖支链上唾液酸含量降低,且藉将细胞培 养于烷酸或其盐类浓度约在6至12 mM之间,并保持渗 透压在450至600mOsm之范围内来增加细胞特定之制造 力。9.如申请专利范围第8项之方法,其中之宿主细 胞乃是中国大颊鼠卵巢细胞(CHO cell)。10.如申请专 利范围第9项之方法,其中之烷酸或其盐类为丁酸 钠。11.如申请专利范围第10项之方法,其中所生成 之醣蛋白属于哺乳类动物醣蛋白。12.如申请专利 范围第11项之方法,其中所生成之醣蛋白是肿瘤坏 死因子受体–免疫球蛋白嵌合体。13.如申请专利 范围第14项之方法,其中之宿主细胞乃是将含有可 溶性第一型肿瘤坏死因子受–免疫球蛋白TNFR1– IgG1嵌合体cDNA之载体以转移感染的方式感染dp12. 中国大颊鼠卵巢细胞株(dp 12. CHO cell)。14.一种制 造人类可溶性第一型肿瘤坏死因子受体–免疫球 蛋白TNFR1-IgG1嵌合体蛋白质的方法,其系包括: (a)将在生长期表现人类TNFR1-IgG1嵌合体的细胞在近 37℃的温度下于此状况下培养一段时间使其达到 最大的生长; (b)将处于制造期的宿主细胞培养,其系在: (1)浓度约为6 mM至12 mM之间的丁酸钠之存在下; (2)保持渗透压在约450至600mOsm之范围内;以及 (3)保持温度介于约30℃及35℃之间下进行。15.一种 制造人类可溶性肿瘤坏死因子受体–免疫球蛋白 TNFR1-IgG1嵌合体蛋白质的方法,其系包括: (a)将在生长期表现人类TNFR1-IgG1嵌合体的哺乳动物 主细胞在近37℃的温度下于此状况下培养一段时 间使其达到最大的生长; (b)将处于制造期间的宿主细胞培养,其系在: (1)浓度约为1 mM至6 mM之间的可酸钠之存在下; (2)保持渗透压在约300至450mOsm之范围内;以及 (3)保持温度介于约30℃及35℃之间下进行。16.如申 请专利范围第15项之方法,其中之宿主细胞乃是中 国大颊鼠卵巢细胞(CHO cell)。17.如申请专利范围第 16项之方法,其中之宿主细胞乃是dp12.中国大颊鼠 卵巢细胞株(dp12. CHO cell line)。图式简单说明: 第一图A和第一图B。第一图A和第一图B显示一处于 制造期间一般细胞培养方法之特定制造力的计算 方法,细胞特定之制造力可以如第一图A中所示存 活之细胞数目的函数(存活之细胞天数)来表示;或 以第一图B中所示之群体细胞体积(PCV)来表示。所 示细胞特定之制造力其可信度在90%的范围内。 第二图A和第二图B。第二图A和第二图B显示以存活 之细胞天数(第二图A)和群体细胞体积(PCV)(第二图B )所计算出之细胞特定之制造力与制造期间所获产 物内唾液酸(NANA)含量之关系。所示为以9种不同方 法(A–I)制造生产出之値。每一数据点代表如表I 中所述一种制造方法所得之値。 |
