发明名称 增加多肽的纤维素分解增强活性的方法
摘要 本发明涉及增加具有纤维素分解增强活性的GH61多肽的活性的方法,其包括:将二价铜阳离子添加至包含具有纤维素分解增强活性的GH61多肽的组合物,其中与没有所述二价铜阳离子的具有纤维素分解增强活性的GH61多肽相比,所述二价铜阳离子和GH61多肽的存在增加酶组合物对所述纤维素材料的降解或转化。本发明亦涉及用于降解或转化纤维素材料的组合物,方法,和用于产生发酵产物的方法。
申请公布号 CN103608461B 申请公布日期 2016.08.03
申请号 CN201280022774.3 申请日期 2012.03.09
申请人 诺维信公司;诺维信股份有限公司 发明人 K.S.约翰森;徐丰;P.沃尔顿;B.麦克布雷尔;H.伦德;C-L.宋
分类号 C12P7/10(2006.01)I;C12P19/10(2006.01)I;C07K14/37(2006.01)I 主分类号 C12P7/10(2006.01)I
代理机构 北京坤瑞律师事务所 11494 代理人 史悦
主权项 一种增加具有纤维素分解增强活性的GH61多肽的活性的方法,其包括:将二价铜阳离子添加至包含GH61多肽的组合物,其中在纤维素材料的降解或转化过程中所述二价铜阳离子以0.0001mM至20mM的浓度存在,其中所述具有纤维素分解增强活性的GH61多肽选自下组:(a)具有纤维素分解增强活性的多肽,其包含[ILMV]‑P‑X(4,5)‑G‑X‑Y‑[ILMV]‑X‑R‑X‑[EQ]‑X(4)‑[HNQ](SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)和[FW]‑[TF]‑K‑[AIV],其中X是任何氨基酸,X(4,5)是4或5个连续位置的任何氨基酸,和X(4)是4个连续位置的任何氨基酸;(b)具有纤维素分解增强活性的多肽,其包含[ILMV]‑P‑X(4,5)‑G‑X‑Y‑[ILMV]‑X‑R‑X‑[EQ]‑X(3)‑A‑[HNQ](SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80),其中X是任何氨基酸,X(4,5)是4或5个连续位置的任何氨基酸,和X(3)是任何三个连续位置的任何氨基酸;其中具有纤维素分解增强活性的多肽包含[ILMV]‑P‑X(4,5)‑G‑X‑Y‑[ILMV]‑X‑R‑X‑[EQ]‑X(4)‑[HNQ](SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)和[FW]‑[TF]‑K‑[AIV],任选地进一步包含:H‑X(1,2)‑G‑P‑X(3)‑[YW]‑[AILMV](SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68),[EQ]‑X‑Y‑X(2)‑C‑X‑[EHQN]‑[FILV]‑X‑[ILV](SEQ ID NO:69),或H‑X(1,2)‑G‑P‑X(3)‑[YW]‑[AILMV](SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71)和[EQ]‑X‑Y‑X(2)‑C‑X‑[EHQN]‑[FILV]‑X‑[ILV](SEQ ID NO:72),其中X是任何氨基酸,X(1,2)是在一个位置或两个连续位置的任何氨基酸,X(3)是任何三个连续位置的任何氨基酸,和X(2)是在两个连续位置的任何氨基酸;或者其中所述具有纤维素分解增强活性的GH61多肽选自下组:(A)多肽,其组成为氨基酸序列,所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:58,SEQ ID NO:60,SEQ ID NO:62,或SEQ ID NO:64的成熟多肽具有至少99%序列同一性;(B)多肽,其由多核苷酸编码,所述多核苷酸组成为核苷酸序列,所述核苷酸序列与SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:37,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:43,SEQ ID NO:45,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:49,SEQ ID NO:51,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:57,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:61,或SEQ ID NO:63的成熟多肽编码序列,或SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11,或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列,或SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:37,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:43,SEQ ID NO:45,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:49,SEQ ID NO:51,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:57,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:61,或SEQ ID NO:63的成熟多肽编码序列的cDNA序列具有至少99%序列同一性;(C)SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:58,SEQ ID NO:60,SEQ ID NO:62,或SEQ ID NO:64的成熟多肽包含一个位置的保守取代的变体;和(D)具有纤维素分解增强活性的多肽,其组成为SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:52,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:58,SEQ ID NO:60,SEQ ID NO:62,或SEQ ID NO:64的成熟多肽;或其具有纤维素分解增强活性的片段。
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