抗桔青霉素鸡卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗桔青霉素鸡卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：(1)制备桔青霉素人工抗原；(2)将桔青霉素人工抗原注入鸡体内进行免疫，免疫4次后持续收集鸡蛋1～2个月；(3)提取抗桔青霉素鸡卵黄抗体；所得的抗桔青霉素卵黄抗体制备成本低、产量大、特异性高，可研发胶体金标记抗体，建立快速、灵敏、特异的桔青霉素快速检测技术，在农产品、食品安全检测中具有广阔的应用前景。

主权项

一种抗桔青霉素鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)合成桔青霉素免疫抗原和包被抗原；(2)将桔青霉素免疫抗原乳化后注入鸡体内进行免疫，免疫4次后持续收集鸡蛋1～2个月；(3)提取抗桔青霉素鸡卵黄抗体；所述的步骤(1)中采用羰基二咪唑法，以牛血清白蛋白为载体合成桔青霉素免疫抗原，采用碳二亚胺法合成桔青霉素包被抗原；采用羰基二咪唑法合成桔青霉素免疫抗原的合成方法为：桔青霉素0.5mg溶于100～200μL甲醇中，加入1mg的羰基二咪唑，混合均匀后，室温反应15～60min，自然挥干，用200μL的二甲基亚砜溶解后，滴入2mL 5mg/mL牛血清白蛋白的0.1mol/L碳酸钠溶液，37℃反应4～8h，反应结束后，反应混合物用0.01mol/L碳酸钠溶液及蒸馏水4℃透析3天，期间换液多次，真空冷冻干燥，于‑20℃保存；取1mg桔青霉素人工抗原粉末溶于1mL 0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中，并与福氏佐剂按体积比为1∶1充分乳化制得免疫抗原；采用碳二亚胺法合成桔青霉素包被抗原的合成方法为：桔青霉素0.5mg溶于500μL二甲基甲酰胺中，先后加入1mg碳二亚胺盐酸盐及1mg N‑羟基丁二酰亚胺，混合均匀后，磁力搅拌下避光室温反应4～6h，然后往混合液中逐滴滴入2mL 5mg/mL卵清白蛋白的pH7.40.1mol/L磷酸盐缓冲液，磁力搅拌下避光室温反应4～6h，反应结束后，反应混合物用0.01mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液及蒸馏水4℃透析3天，期间换液多次，真空冷冻干燥，于‑20℃保存。