基于实时荧光定量PCR的猪LYRM1基因组织表达谱的建立方法

摘要

本发明提供了一种基于实时荧光定量PCR的猪LYRM1基因组织表达谱的建立方法。本发明应用实时荧光定量PCR技术构建了一套适宜的LYRM1基因组织表达谱建立方法，通过该方法建立猪LYRM1基因在不同组织中的表达谱，具有操作简便、快速高效、敏感性高、特异性强的特定、并且有效解决了PCR污染的问题，且自动化程度高，比采用其它方法来建立组织表达谱适应性更强，对于阐明LYRM1基因表达的作用机理具指导作用及参考意义。

主权项

一种基于实时荧光定量PCR的猪LYRM1基因组织表达谱的建立方法，其特征在于：采用Trizol法分别提取已屠宰的猪的9种组织的总RNA，所述的9种组织包括心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、胃及背最长肌；并对提取的总RNA进行cDNA的反转录合成；以上述cDNA为模板，分别对LYRM1和GAPDH进行常规PCR扩增；LYRM1基因上游引物的序列为5’‑ AGATGGAAGACACCGTGAAAGAG‑3’， LYRM1基因下游引物的序列为5’‑GCCTTGGATAGGGAATCTGGTAG‑ 3’； GAPDH基因上游引物的序列为5’ ‑ACTCACTCTTCTACCTTTGATGCT ‑3’， GAPDH基因下游引物的序列为5’ ‑TGTTGCTGTAGCCAAATTCA‑ 3’； 将cDNA混池后进行2倍比稀释作为模板，进行实时荧光定量PCR扩增，获得标准曲线；荧光定量PCR每个样品，并用ddH₂O做阴性对照；采用2^‑△△Ct定量分析方法对猪LYRM1基因在不同组织进行差异表达量分析，构建组织表达谱。