| 摘要 |
Περιγράφονται cDNA κλώνοι κωδικοποιητικοί για TGF-β2 που χρησιμοποιούνται για να κατασκευάσουν φορείς έκφρασης ικανούς να κατευθύνουν την υψηλού επιπέδου έκφραση ώριμου βιολογικά δραστικού TGF-β2 σε κύτταρα ωοθήκης Κινεζικού Hamster, που έχουν υποστεί διατομή (CHO κύτταρα). Ο TGF-β2 που παράγεται και εκκρίνεται από παράγοντες διατομής CHO, έχουν ειδική δραστηριότητα που υπολογίζεται να είναι περίπου η μισή εκείνης του ανασυνδυαζόμενου TGF--β1. Οι κλώνοι απομονώθηκαν από μια κυτταρική γραμμή ανθρώπινου προστατικού αδενοκαρκινώματος που είχε υποστεί αγωγή με Tamoxifen (PC-3) με τη χρήση ολιγονουκλεότιδο διερευνητών επί τη βάσει της μερικής αλληλουχίας αμινοξέος καθαρισμένου TGF-β2, από μία κυτταρική γραμμή Αφρικανικού πράσινου πιθήκου, την BSC-40. Οι cDNA αλληλουχίες, προβλέπουν ότι ο TGF-β2 συντίθεται σαν μορφές προδρόμου πολυπεπτιδίου από τις οποίες λαμβάνεται με πρωτεολυτικό τεμαχισμό η ώριμη 112 αμινοξέος TGF-β2 υπομονάδα. Οι πρωτεϊνες που κωδικοποιούνται από τα ανθρώπινα TGF-β1 και TGF-β2 cDNA, δείχνουν μία συνολική ομολογία 41%. Οι ώριμες και αμινο-τερματικές περιοχές, δείχνουν 71% και 31% ομολογία αντίστοιχα. Ανάλυση κηλίδος κατά Νorthern πιστοποίησε TGF--β2 αντίγραφα, 4.1 kb, 5.1, και 6.5 kb με τη χρησιμοποίηση mRNA από ορισμένες διαφορετικές πηγές. Ανάλυση πολυαδενυλιωμένου RNA από κύτταρα PC-3 που έχουν υποστεί κατεργασία με Tamoxifen, έδειξαν ότι αυτά τα κύτταρα περιέχουν μεγαλύτερες ποσότητες TGF-β1 αντιγράφων, από ό,τι ο TGF-β, αν και παράγουν περισσότερο TGF-β2 πρωτεϊνη, από ό,τι TGF-β1. Τούτο υποδηλώνει ότι υπάρχει ένα μετα-μεταγραφικό επίπεδο ρύθμισης για την παραγωγή αυτών των πρωτεϊνών. ω |
