一种快速检测番茄黄化曲叶病毒的试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种快速检测番茄黄化曲叶病毒的试剂盒及其应用。本发明根据我国发生的番茄黄化曲叶病毒优势株系的核苷酸序列设计出一对特异性引物，同时配制了用于样品处理的提取缓冲液和洗涤缓冲液。使用本发明的试剂盒进行番茄黄化曲叶病毒的快速检测，感病番茄样品无需提取DNA，只需少量病叶样本(约10mg)，病叶经提取缓冲液、洗涤缓冲液处理后，只需进行一次PCR反应，即可实现对番茄黄化曲叶病毒的鉴定。而且，实验证明本发明的方法具有较高的灵敏度，达到1E4。同时，该方法也可对番茄黄化曲叶病毒的传毒介体Q型与B型烟粉虱进行含毒鉴定。与传统的生物学、血清学相比，本发明的方法是一种更为简便、快速、经济、灵敏的番茄黄化曲叶病毒检测方法。

主权项

一种快速检测番茄黄化曲叶病毒的试剂盒，其特征在于包括提取缓冲液、洗涤缓冲液以及用于检测番茄黄化曲叶病毒的引物组；其中，所述的提取缓冲液中含有0.05‑0.15mol/L的磷酸钾、体积百分比为0.05‑0.15％的巯基乙酸，0.005‑0.015mol/L的二乙基二硫代氨基甲酸钠以及0.001‑0.005mol/L的乙二胺四乙酸，其余为双蒸水，调节pH至7‑8；其中，所述的洗涤缓冲液中含有8‑8.5g/L的NaCl、0.5‑1g/L的KCl、1‑1.5g/L的Na₂HPO₄，0.1‑0.5g/L的KH₂PO₄以及体积百分比为0.02‑0.1％的TWEEN‑20，其余为双蒸水；其中，所述的引物组由上游引物和下游引物组成，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。