一种槟榔江水牛精液冷冻工艺方法

摘要

本发明涉及槟榔江水牛精液冷冻工艺方法领域，公开了槟榔江水牛精液制作时的一条冷冻曲线，包括下述步骤：(1)步骤一：精液的采集；(2)步骤二：精液的稀释；(3)步骤三：精液的分装与平衡；(4)步骤四：精液的冷冻；(5)步骤五：冷冻精液的解冻和镜检。该槟榔江水牛精液冷冻工艺方法的目的在于制作出一条冷冻曲线，在后期冷冻过程中，根据本曲线试验找出该品种槟榔江水牛精子在冷冻过程中不同阶段最适合的冷冻降温速率和危险温度区间，最终将其科研成果运用到生产实践中，提高生产质量和生产效率；且得出曲线V能明显提高该槟榔江水牛品种的冻后活力和降低畸形率，有效提高牛冻精生产质量和生产效率。

主权项

一种槟榔江水牛精液冷冻工艺方法，包括有精液的采集、精液的稀释、精液的分装与平衡、精液的冷冻、冷冻精液的解冻和镜检，其步骤如下：步骤一、精液的采集：先用假阴道采集公牛的精液，通过显微镜检测原精活力在0.6以上，密度在6亿以上方可进行稀释；步骤二、精液的稀释：通过精子密度仪测量原精的密度和稀释量，使用自配的卵黄稀释液作为本次实验稀释液，放置32～34℃水浴锅中备用，按测量的稀释量进行一次稀释，稀释时应沿三角瓶的边沿缓慢倾倒；步骤三、精液的分装与平衡：再将稀释后的精液放于32～34℃水浴中暂存10min后，在20℃室温下封装到0.25ml细管中，将封装好的精液细管分成五份，分别水平摆放在齿状冷冻架上，然后放在4℃低温平衡柜中3‑4h；其特征在于:所述还包括步骤四、精液的冷冻所述先将平衡好的精液用下述五种冷冻曲线进行冷冻，初冻温度和冷冻结束温度均是4℃和‑140℃；五条冷冻曲线如下：曲线Ⅰ:4℃到‑10℃，速率5℃/min；‑10℃到‑100℃,40℃/min；‑100℃到‑140℃，速率20℃/min；曲线II:4℃到‑10℃，速率5℃/min；‑10℃到‑140℃,40℃/min；曲线III:4℃到‑10℃，速率5℃/min；‑10℃到‑140℃,20℃/min；曲线IV:4℃到‑10℃，速率5℃/min；‑10℃到‑40℃,40℃ /min；‑40℃到‑140℃，速率20℃/min；曲线V:4℃到‑10℃，速率5℃/min；‑10℃到‑60℃,40℃/min；‑60℃到‑140℃，速率20℃/min；步骤五、冷冻精液的解冻和镜检：最后将实验样本分别取三支置于37℃水浴锅中解冻，解冻后推入试管中混合均匀，用移液器吸取10微升滴于载玻片上加盖玻片，在38℃载物台上用200倍显微镜观察精子活力，每个样片取三个视野，三个视野活力的平均值即为该样本的活力。