一种浸钴细菌的选育方法

摘要

一种浸钴细菌的选育方法，属生物冶金技术领域。本发明的方法按以下步骤进行：在硫化铜钴矿山的矿坑水中采集嗜酸浸矿菌菌液；将嗜酸浸矿菌菌液接种获得培养后细菌，稀释获得接种菌液；将接种菌液驯化后获得驯化菌液；将驯化菌液制成选育溶液，再制备成无铁选育溶液，无铁选育溶液中加入硫化钴矿进行无铁选育；重复无铁选育，将无铁选育溶液静置至固体沉淀，然后过滤去除液体，获得的细菌放入9K培养基中制成细菌浓度为10⁸cell/mL的菌液，获得选育的浸钴细菌。本发明获得的浸钴细菌是一种适应矿床环境的高活性、高效益的浸矿菌，对进一步开发利用钴资源和增加钴产量具有重要的经济和战略意义。

主权项

一种浸钴细菌的选育方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)选取浸矿菌为含有氧化亚铁微螺菌、嗜酸氧化亚铁硫杆菌和嗜酸氧化硫硫杆菌的混合菌；(2)将浸矿菌菌液在9K培养基中接种，接种浸矿菌菌液占总体积的20％，调节pH值至1.2～2.5，在空气浴恒温振荡箱中，在温度60℃和转速190rpm条件下进行一次振荡培养，当浸矿菌生长至对数期时，将嗜酸浸矿菌菌液取出再放入9K培养基中按上述条件进行二次振荡培养，当浸矿菌生长至对数期时，将浸矿菌菌液取出再放入9K培养基中按上述条件进行三次振荡培养；(3)将三次振荡培养后的浸矿菌菌液用孔径为0.22微米的微孔滤膜过滤去除液体，获得培养后细菌，用9K培养基将培养后细菌稀释至浓度为10⁸cell/mL，获得接种菌液；(4)将接种菌液放入9K培养基中制成接种溶液，其中接种菌液占总体积的5％，9K培养基占总体积的95％，调节接种溶液的pH值至1.2～2.5，再加入硫酸钴至钴离子浓度为1g/L，然后在空气浴恒温振荡箱中，在温度44～60℃和转速150～240rpm条件下进行一次驯化，当接种溶液中细菌数量增长至浓度为10⁸cell/mL以上时，且9K培养基中二价铁离子全部被氧化时，将菌液取出进行下一次驯化，每次驯化时加入硫酸钴至钴离子浓度比上一次驯化多1g/L，共进行35次驯化后获得驯化菌液；(5)将驯化菌液取出后放入9K培养基中制成选育溶液，其中驯化菌液占选育溶液总体积的5～10％，9K培养基占选育溶液总体积的90～95％，调节选育溶液的pH值至1.2～2.5，然后在空气浴恒温振荡箱中，在温度44～60℃和转速150～240rpm条件下进行选育；(6)当选育溶液中二价铁离子全部被氧化时，向选育溶液中加入硫化钴矿，硫化钴矿的重量占选育溶液总重量的1％；当选育溶液中细菌的数量增长至10⁸cell/mL以上时，取出1/4的选育溶液作为备用菌液；(7)将备用菌液放入无铁9K培养基中制成浸矿细菌选育溶液，无铁9K培养基占浸矿细菌选育溶液总体积的90～95％，其余为备用菌液；向浸矿细菌选育溶液中加入硫化钴矿，硫化钴矿的重量占浸矿细菌选育溶液总重量的2％；调节浸矿细菌选育溶液的pH值至1.2～2.5，然后在空气浴恒温振荡箱中，在温度44～60℃和转速150～240rpm条件下进行浸矿细菌选育；(8)当浸矿细菌选育溶液中细菌的数量增长至10⁸cell/mL以上时，取出1/4的浸矿细菌选育溶液作为备用菌液，重复按步骤(7)的方式进行浸矿细菌选育，每次加入硫化钴矿的重量占浸矿细菌选育溶液的总重量比上一次多1％，并且最后一次加入硫化钴矿的重量占浸矿细菌选育溶液总重量的10％；当最后一次浸矿细菌选育结束后，将浸矿细菌选育溶液静置至固体沉淀，然后将上清液部分用孔径为0.22微米的微孔过滤膜过滤去除液体，获得的细菌放入9K培养基中制成细菌浓度为10⁸cell/mL的菌液，获得选育的浸钴细菌。